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应用简介 DNA是遗传信息的载体,是最重要的生物信息分子,是分子生物学研究的主要对象,因此DNA取方面的工作，那就根本谈不上进行分子生物学方面的实验。在DNA提取过程中应做到：1、根据不同研究需要，保证结构的相应完整性；2、尽量排除其它大分子成分的污染(蛋白质、多糖及RNA等)；3、保证提取样品中不含对酶有抑制作用的有机溶剂及高浓度的金属离子。下面结合不同的研究对象列出几种相应的DNA提取方法。技术原理原核生物的基因是连续不间隔的,直接用限制酶从DNA切取就可得到目的基因，再PCR扩增后就能得到大量目的基因。真核细胞核基因组DNA编码的基因，以及感染真...

基因提取
应用简介酶联免疫吸附实验(ELISA)即将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等，具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。技术原理采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体（免疫吸附剂）②酶标记的抗原或抗体（标记物）③酶作用的底物（显色剂）测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上，但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体（抗原）与酶结合成的偶联物...

ELISA 检测
应用简介核酸提取是分子生物学的基本组成部分，高质量的核酸在分子生物学上的应用至关重要。核酸提取为大量广泛研究和应用提供了答案（例如：克隆、qRT-PCR和全基因组、转录组范畴中的二代测序技术），获得的核酸可以在分析基础研究和疾病研究中的基因表达、跟踪对药物治疗的反应、识别新物种并深入了解进化过程、诊断疾病等方面以不同方式进行应用。技术原理核酸具有贮存和传递遗传信息等重要生物功能，是分子生物学研究的主要对象。采用常规吸附柱法抽提样本中的DNA、RNA，为下游实验提供高纯度和高浓度的模板。DNA提取方法：对基因组DNA的提取方法主要有CTAB，SDS和其...

核酸提取
应用简介质粒多为一些双链、环状的DNA分子，是独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒是进行分子生物学实验操作，进行遗传工程改良物种等工作时最主要的DNA载体。技术原理质粒DNA提取方法有3种：碱裂解法、煮沸法和去污剂(如Triton和SDS)裂解法。前两种方法比较剧烈，适用于较小的质粒(<15kb)。去污剂裂解法则比较温和，一般用于分离大质粒(>15kb)。碱裂解法是一种应用为广泛的制备质粒DNA的方法，其原理为：染色体DNA比质粒DNA分子大得多，且染色体DNA为线状分子，而质粒DNA为共价闭合环状分子；当用碱处理DN...

质粒提取
应用简介核酸和蛋白质是组成生命的主要生物大分子，两者的相互作用是构成生命活动的生长、繁殖、运动、遗传和代谢等生命活动的基础。研究蛋白质和核酸间的相互作用是人们探索生命现象奥秘的关键，CHIP检测实验是应用于蛋白与核酸互作关系的重要参考。技术原理 CHIP实验在活细胞状态下固定蛋白质－DNA复合物，并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过免疫学方法沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段，通过对目的片断的纯化与检测，从而获得蛋白质与DNA相互作用的信息。实验方法技术总结 1、细胞样本所需数量较大，需要提前按照所需细胞的要求整理，保...

CHIP 检测
应用简介 Co-IP主要用于检测蛋白质与蛋白质之间相互作用，是IP实验的一种扩展，基于IP反应的潜力，在样品溶液中捕获和纯化主要目标（抗原等）及通过天然相互作用与靶标结合的其他的大分子。此外，还可以利用Co-IP来确定在不同条件下的蛋白质相互作用。技术原理免疫共沉淀是利用抗原和抗体的特异性结合以及细菌的ProteinG或A能特异性地结合到免疫球蛋白的Fc片段的方法。其基本原理是在细胞裂解液中加入感兴趣蛋白的抗体，孵育后再加入与抗体特异结合的结合于磁珠的ProteinG或A，若细胞中存在与兴趣蛋白相结合的目的蛋白，就可以形成蛋白复合物：“目的蛋白—兴趣蛋...

co-ip检测
应用简介蛋白质免疫印迹法(WesternBlot)，简称WB，是指通过SDS-PAGE胶将不同分子量的蛋白质分离开，然后将目标蛋白转移到载体(PVDF)膜上，利用抗原抗体的特异性结合，用特异性的一抗结合目标蛋白，用HRP标记的二抗结合一抗，再加以ECL发光液显色，检测组织或者细胞内某种或者某些特异性蛋白质的表达。蛋白质免疫印迹是做蛋白质分析的一种常规技术，常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析，还可以用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA相互作用后续分析。WB技术现已广泛应用于蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个...

免疫印迹（Western blot）检测
应用简介简单来讲，CRISPR/Cas9是一种分子生物学技术，通过这种技术科研人员可以对细胞和生物体内的基因进行编辑。所谓的基因编辑就是通过某种生物手段和技术，对生物体内的遗传物质进行修改。基于原核生物的获得性免疫系统研发出的CRISPR/Cas9技术只包含两种重要的成分，一种是行使DNA双链切割功能的Cas9蛋白，而另一种则是具有导向功能的sgRNA（single guide RNA）。当细胞内同时表达sgRNA和Cas9蛋白时，Cas9蛋白通过与sgRNA结合，靶向到目的DNA序列上发挥DNA双链切割的功能。DNA序列被切割产生断裂后，引发细胞内部...

CRISPRCas9技术
应用简介流式细胞技术（flowcytometry,FCM）是利用流式细胞仪进行的一种单细胞定量分析和分选技术。流式细胞术是单克隆抗体及免疫细胞化学技术、激光和电子计算机科学等高度发展及综合利用的高技术产物。技术原理流式细胞仪使悬浮在液体中分散的经荧光标记的细胞或微粒逐个通过样品池，同时由荧光探测器捕获荧光信号并转换成分别代表前向散射角、侧向散射角和不同荧光强度的电脉冲信号，经计算机处理形成相应的点图，直方图和加三维结构图像进行分析。用于FCM的样本是单细胞悬液，可以是血液、悬浮细胞培养液、各种体液、新鲜实体瘤的单细胞悬液以及石蜡包埋组织的单细胞悬液等...

流式细胞技术
应用简介荧光定量PCR是检测生物样品中RNA含量的最普遍的方法，通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。目前主要使用Sybrgreen和taqman法对RNA含量进行检测。技术原理1、SYBRGREENI是一种只与DNA双链结合的荧光染料。当它与DNA双链结合时，发出荧光；从DNA双链上释放出来时，荧光信号急剧减弱。因此，在一个体系内，其信号强度代表了双链DNA分子的数量。SYBRGreen荧光染料定量PCR的基本过程是：1、开始反应，当SYBRG...

荧光定量PCR
应用简介 DNA甲基化是基因表达调控的一种重要机制，DNA甲基化检测是指利用各种方法对肿瘤细胞DNA甲基化程度进行测定。在恶性肿瘤的发展中，甲基化的状态并不是一成不变，肿瘤细胞内全基因组的低甲基化程度与疾病进展、肿瘤大小和恶性程度都有密切的关系，DNA甲基化检测对肿瘤恶性程度的判断有重要意义。技术原理 DNA甲基化是基因表达调控的一种重要机制，DNA甲基化检测是指利用各种方法对肿瘤细胞DNA甲基化程度进行测定。在恶性肿瘤的发展中，甲基化的状态并不是一成不变，肿瘤细胞内全基因组的低甲基化程度与疾病进展、肿瘤大小和恶性程度都有密切的关系，DNA甲基化检测对肿...

DNA甲基化检测
技术原理首先设计根据需求设计shRNA引物一套，完成引物退火。将载体进行双酶切反应，双酶切后割胶回收。将shRNA和双酶切回收后的载体，使用试剂盒进行重组成环状片段，转入制备好的细菌感受态细胞，对长出的单克隆菌落送测序公司进行测序鉴定，比对正确的克隆即为构建成功的shRNA表达载体。 shRNA的靶点选择决定着对靶向基因的表达敲低效果，通常涉及3-4个shRNA靶点同时进行实验，根据后续检测结果确定最佳靶点后，安排后续实验。实验方法技术总结体内抑制效果强： shRNA表达载体生物体内的抑制效果强于普通合成的siRNA，且能与组织特异性定位启动子协同作...

shRNA载体构建

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