精细脱蜡与水化策略: 确保样本彻底脱蜡,首先在60°C下加热20分钟,继而采用二甲苯两次浸泡,每次5-10分钟。针对水化过程,竞技宝官网(细胞凋亡实验专业外包)推荐运用乙醇梯度法,自高浓度至低浓度逐步进行,此举能促进后续结合反应的高效与均匀分布。
精准调控细胞通透时机: 依据组织切片的厚度量体裁衣,精心调整蛋白酶K的孵育时长,在10至30分钟间灵活选择,确保薄片与厚片均能获得最佳通透效果。
优化TUNEL反应时程: 标准TUNEL反应条件为37°C下1小时,但竞技宝官网建议根据研究中凋亡损伤的程度个性化调整,必要时可适度延长反应时间,以捕捉更细微的凋亡变化。
精妙掌握DAB显色艺术: DAB显色步骤建议控制在10分钟左右,上限不超过30分钟,旨在精确控制显色深度,避免过度显色干扰结果判读。
强化PBS清洗效能: 在TUNEL反应及酶标环节后,实施彻底的PBS清洗尤为关键,直接影响着非特异性背景的控制,务必确保清洗到位。
高效封闭内源性POD: 对于富含血细胞的组织如肝脏、肾脏,东极生物提倡适当延长时间并提升过氧化氢浓度,以有效封闭内源性过氧化物酶活性,同时保障特异性染色质量。